Diagnosis

Biological method

• Hemagglutination assay (1 HA unit = 1.0E+04 particles/ml)
• Plaque assay
  Immunological method
• ELISA (direct(ag), indirect(ab), sandwich(ag))
• POCT(LFA)
• RIA
  Molecular(NA) method
• IF (for research)
• Western blotting
• PCR (Kary B. Mullis), qPCR(SYBR Green, Molecular beacon), RT-PCR

Cultivation

1. Tissue Culture - primary cell (기르기 엄청 어렵고 한달만 자람)
   1. embryonated eggs
      • Chrioallantonic membrane inoculation : HSV, Poxivirus, Rous sarcoma
      • Amniotic inoculation : Influenze, Mumps
      • Yolk sac inoculation : HSV
      • Allantonic inoculation : Influenza, Mumps, Newcastle, Avian
2. Immotalized cell culture (비교적 잘 자라고 오래 키울 수 있음)
   • cancer cell
   • immotalized cell

Virus contitation

1. plaque assay → PFU
2. Fluorecent-focus assay

Isue culture Infection Dose 50 (virus를 반복 titre한 후 50개 cell well을 infection 시키는 level)

MOI (Multiplicity of infection)

infection agent와 host cell의 수 비율; MOI = 1 : virion과 cell의 수가 동일하다는 뜻
How much of cells would be infected by at least 1 virion (k=1) when moi is 1(m=1)?

P(k) = (e⁻ᵐmᵏ)/k!
P(k) = K개의 agent로 감염될 수 있는 cell의 수, k = number of infectious agent, m = MOI, e ≃ 2.718
ex) P(0) = infectious agent 때려박아도 cell을 감염시킬 수 없는 정도의 최대 virion의 양
MOI = 1일 경우 P(0) = e⁻¹*1¹/1! = e⁻¹ = 1/2.718 = 0.37
	즉 MOI가 1인 상태 (ex) cell 100개, virion 100개)에서 0개 virion이 감염시킬 수 있는 cell의 수는 0.37개 (=감염이 안될 확률이 37%)
P(>1) = 1 - e⁻ᵐ(m + 1)ᵏ
MOI 1인 상태에서 1개 이상의 virion이 감염될 cell의 수
P(≧1) = 1 - P(0) = 1 - 0.37 = 0.63 = 63%

Virus purification

centrifugation

1. Sucurose gradient; separate by size
2. Cesium chloride; Separated by density

Manipulation

forward genetics : phenotype의 분석의 일환으로 어떤 gene이 해당 phenotype에 영향을 주는 지 공부
reverse genetics : gene에 mutation을 줘 놓고 phenotype을 분석
- infectious clone(전체 viral genome을 포함하는 plasmid cector), viral replicon(structural protein이 blocking된 viral genome)